Выделение полноразмерной поли(А) мРНК на магнитных частицах

Набор предназначен для быстрого прямого выделения поли(А)мРНК.

Мы рекомендуем проводить выделение поли(А)мРНК из предварительно выделенной тотальной РНК. Такой выделение позволяет получить мРНК максимальной чистоты. Возможно также выделение непосредственно из ткани или культуры клеток.

Максимальное количество, на которое расчитан набор - до 3 г ткани или до 10⁸ клеток.

Принцип набора основан на связывании мРНК непосредственно из лизата ткани или культуры клеток с использованием магнитных частиц (МЧ), покрытых стрептавидином. Гибриды (биотин-меченый олиго(dТ) праймер, гибридизованный с поли(А) последовательностью мРНК) собирают, используя МЧ и магнитный штатив. Набор позволяет выделять как маленькие, так и большие количества высокоочищенной полноразмерной мРНК, которую затем можно использовать для ОТ-ПЦР (RT-PCR), синтеза кДНК, Нозерн блотов или для экспериментов по трансляции in vitro.
Не смотря на то, что набор расчитан на количества до 3 г ткани или до 10⁸ клеток, выход мРНК, которую можно получить из этого количества материала, в значительной степени зависит от вида ткани или клеток и составляет приблизительно от 10 до 100 мкг мРНК.
Использование системы для гибридизации с биотин-меченым олиго(dТ) праймером в растворе дает более эффективный результат, чем связывание мРНК на поли(dТ)-целлюлозе или даже на МЧ с пришитым поли(dТ) хвостом.
Наш набор мы комплектуем особым биотин-меченым олиго(dТ) праймером, где поли(dT) составляет 30 оснований. На 5'-конце праймер несет 18-мерный гидрофильный спейсер с тремя пришитыми молекулами биотина. Спейсер такой длины облегчает взаимодействие праймера и поли(А) последовательностью мРНК, а наличие трех молекул биотина значительно увеличивает связывание образующихся гибридов с МЧ, покрытыми стрептавидином.