Pfu Plus полимераза, 200 ед., буфер с Mg2+

Pfu Plus полимераза является термостабильным рекомбинантным ферментом массой прибл. 92кДа. Источник происхождения этого фермента Pyrococcus furiosus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70-74°С (хотя фермент может работать и при более низких температурах от 25°С), время полужизни при 94°С составляет не менее 30 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'->3' в присутствии ионов Mg2+ и при соответствующем значении рН, а также обладает 3'->5' экзонуклеазной активностью (так называемая "проверочная активность" - "proofreading activity"). Наличие 3'->5' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для ПЦР, где необходимо получение продукта с высокой точностью синтеза. При работе в оптимальных условиях Pfu Plus полимераза допускает минимальное количество ошибок по сравнения с другими термостабильными полимеразами. Амплификаты, полученные с использованием Pfu Plus полимеразы, не имеют на концах выступающую букву A, т.е., являются тупоконечными. Это позволяет клонировать полученный продукт без дополнительных обработок. Оптимальная длина амплификата, которую мы рекомендуем получать с использованием Pfu Plus полимеразы 2'000 п.н.

Важная особенность Pfu полимеразы заключается в том, что наличие 3'->5' экзонуклеазной активности делает этот фермент "медленным". При этом снижается чувствительность к низкокопийной матрице и сокращается выход продукта. Для более детального ознакомления с особенностями Pfu полимеразы смотрите раздел Загрузки.

Кат.№ Описание Количество Сумма, руб.
E0511 Pfu Plus полимераза, 5 ед./мкл
200 ед., буфер с Mg2+
+
-
8 000 руб
  • Применение
  • Характеристики
  • Состав буфера
  • Загрузки
  • Дополнительно

проведение высокоточного ПЦР,
подготовка для клонирования и другие приложения, требующие высокой точности синтеза,
мечение ДНК различными меченными нуклеотидами (радиоактивными и нерадиоактивными)

 

Наличие у PfuPlus ДНК полимеразы "проверочной"  3'->5' экзонуклеазной активности замедляет скорость синтеза. Это сказывается на конечном выходе продукта.

 

Разница выхода конечного подукта в зависимости от количества добавленной матрицы

 

ДНК матрица:                                

Размер генома M. hominis:           

Объем смеси:                                  

Размер фрагмента:                        

Количество циклов:                        

бактериальная ДНК Mycoplasma hominis

0.68х106 пар оснований

25 мкл

334 пар нуклеотидов

40

 

A

 B

нанесение по дорожкам (слева направо):

1 – 1 нг, 2 – 100 пг, 3 – 10 пг, 4 – 1 пг, 5 – 100 фг,  6 – 10 фг

A : ColoredTaq полимераза,  1.25 ед. в смеси

B : PfuPlus полимераза,   2.5 ед. в смеси                                              

  • Хранение- 20°C
  • Транспортировкаспециальных условий не требуется

Буфер с Mg2+ (x10):

700 mM Трис-HCl, pH 8.6 / 25°C, 166 mM (NH4)2SO4, 25 mM MgCl2

Буфер без Mg2+ (x10):

700 mM Трис-HCl, pH 8.6 / 25°C, 166 mM (NH4)2SO4

PfuPlus ДНК полимераза

  
Скачать