SileksMag-COOH, магнитные частицы с COOH группой
для ковалентной иммобилизации антител, белков, ферментов, нуклеотидных зондов
- Применение
- Характеристики
- Иммобилизация
- Загрузки
- Дополнительно
Магнитные частицы с карбоксильной группой (-COOH) поставляются в виде водной суспензии в готовом для использования виде. Использование частиц возможно также в системах автоматического выделения.
Магнитные частицы с карбоксильной группой дают возможность осуществить ковалентную иммобилизацию антител или белка, а также 5'-амино модифицированных олигонуклеотидов.
Частицы представляют собой парамагнитное ядро, инкапсулированное в покрытым гидрофильным инертным носителем оболочку. Частицы имееют на поверхности высокую плотность активных СООН групп, позволяющих осуществлять высокоэффективную ковалентную пришивку.
Основное преимущество данных частиц в том, что они обладают низкой неспецифической сорбцией белков и нуклеиновых кислот на своей поверхности.
Ковалентное связывания белка на поверхности частиц дает возможность для:
- иммуномагнитного выделения уникальных клеток или белков из биологических жидкостей,
- повышения чувствительности иммунологических исследований за счет концентрирования специфического материала
Пришивка олигонуклеотидного зонда на поверхности частиц используется для:
- иммуномагнитного выделения уникальных нуклеотидных последовательностей (в том числе, мРНК, свободной от примесей посторонних нуклеиновых кислот) из биологических жидкостей и клеток
- повышения чувствительности исследований за счет концентрирования специфического материала
Мы рекомендуем использовать данные частицы для пришивки нуклеотидных зондов. Поверхность частиц имеет минимальную неспецифическую сорбцию, что позволяет успешно избавляться от неспецифических компонентов.
После ковалентной иммобилизации дополнительные процедуры обработки частиц не требуются.
- ОсноваОксид железа (III)
- Тип магнетизацииСуперпарамагнетик (нет остаточного намагничивания)
- Форма частицСфера
- Размер150-200 нм
- Концентрация10 мг/мл
- Емкость частиц (зависит от буфера)около 120 мкг бычьего сывороточного альбумина (БСА, 65 кДа) или 100 мкг IgG (150 кДа) на 1 мг частиц
20 мкг олигонуклеотидного зонда на 1 мг частиц - Буфер хранениястерильная вода
- Условия хранения+4°C, не замораживать
- ТранспортировкаСпециальных условий не требуется
Преимущества ковалентного связывания по сравнению с пассивной адсорбцией
• Ковалентное связывание позволяет связать на поверхности на 20-40% белка больше, чем при пассивной адсорбции
• Ковалентное связывание легко стандартизовать и унифицировать, получая частицы с определенным уровнем покрытия
• Ковалентно пришитые белки значительно стабильнее. Так, после 1 часа при 56°С количество IgG на ковалентно пришитых частицах остается практически неизменным около 100% , в то время, как на частицах с пассивной адсорбцией только 50-70%
• В случае маленьких белков, только ковалентная пришивка может удержать их на поверхности
• Когда белок привязан ковалентно, можно создавать достаточно жесткие условия для уменьшения неспецифического взаимодействия связанного белка с другими белками.
Иммобилизация белка
Количество иммобилизуемого белка
Предлагаемые частицы могут связать не менее 120 мкг бычьего сывороточного альбумина (БСА, 65 кДа) или 100 мкг IgG (150 кДа) на 1 мг частиц. При связывании белков, отличных от указанных, следует учитывать размер белка: более мелкие белки могут быть связаны в большем количестве, более крупные в меньшем. По мере того, как иммобилизуемый белок связывается на поверхности, скорость и эффективность связывания уменьшаются. Решить эту проблему можно либо увеличением времени иммобилизации, либо создавая избыток белка больше того количества, которое может быть иммобилизовано частицами. Конечно, в случае дорогостоящих иммобилизуемых материалов последний вариант нежелателен.
Влияние температуры и времени на процесс иммобилизации
Температура имеет слабое влияние на процесс ковалентной иммобилизации. В том случае, если иммобилизуемый белок термолабилен, можно проводить реакцию иммобилизации при +10°С. Увеличение продолжительности самого процесса иммобилизации с 2 часов до 5 часов увеличивает количество иммобилизованного белка приблизительно на 10-15%.
Иммобилизация олигонуклеотидного зонда
Количество олигонуклеотидного зонда
Предлагаемые частицы могут связать не менее 20 мкг 5'-амино модифицированного олигонуклеотида на 1 мг частиц.
Влияние температуры и времени на процесс иммобилизации
Реакцию иммобилизации следует проводить при комнатной температуре в течение 3 часов.
Проведение иммобилизации при +50°С или увеличение продолжительности самого процесса иммобилизации (например, в течение ночи) приводит, по нашим данным, к существенному ухудшению результата.